Advanced microscopy to resolve the higher-order organization of the exocyst

Mostra el registre complet Registre parcial de l'ítem

• dc.contributor.author Puig Tintó, Marta
• dc.contributor.other Gallego, Oriol
• dc.contributor.other Universitat Pompeu Fabra. Departament de Medicina i Ciències de la Vida
• dc.date.accessioned 2024-03-16T02:33:24Z
• dc.date.available 2024-03-16T02:33:24Z
• dc.date.issued 2023-05-08T14:54:43Z
• dc.date.issued 2023-05-02
• dc.date.issued 2025-05-02T02:00:00Z
• dc.date.modified 2024-03-15T10:57:31Z
• dc.description.abstract The exocyst is an heterooctameric protein complex that tethers secretory vesicles to the plasma membrane during exocytosis. Each exocytic event is mediated by 10-15 exocysts. However, how multiple exocysts organize in time and space to accomplish their function remains unknown. We resolved the dynamic higher-order structure of the exocyst by correlating live-cell imaging and super-resolution microscopy. Fluorescent temporal markers demonstrated that multiple exocysts follow dynamic higher-order structures that switch from small and compact clusters to wider ring-like organizations with an asymmetric distribution of the exocysts around a central cavity. Conditional mutants linked conformational changes with defined molecular functions and cryo-electron tomography provided accurate descriptors of the vesicle geometry. We propose a model were the multiple exocysts bind the vesicle as compact clusters for four seconds. In a Sec9-dependent process, the exocysts open to form stable arcs and ring-like architectures that are disassembled by Sec18 eight seconds after tethering initiation.
• dc.description.abstract L’exocyst és un complex proteic que uneix vesícules de secreció a la membrana plasmàtica durant l’exocitosi. Entre 10 i 15 exocysts participen en cada esdeveniment d’exocitosi, però en desconeixem la seva l’organització espacial i temporal. La combinació de microscòpia en cèl·lules vives i de super-resolució ens ha permès resoldre la supra-estructura de l’exocyst. Mitjançant l’ús de marcadors temporals hem demostrat que aquesta supra-estructura és dinàmica: comença formant clústers compactes que es transformen en estructures anulars al voltant de les quals els exocysts es distribueixen asimètricament. Gràcies als mutants condicionals hem assignat canvis conformacionals a funcions moleculars concretes, i la crio-tomografia electrònica ens ha permès descriure geomètricament les vesícules. Proposem un model on els exocysts s’uneixen a la vesícula formant clústers durant 4 segons. Sec9 indueix l’obertura d’aquests exocysts, que passen a formar arcs i anells estables. 8 segons després de l’inici del procés, l’acció de Sec18 desmunta aquests anells.
• dc.description.abstract Programa de doctorat en Biomedicina
• dc.format 192 p.
• dc.format application/pdf
• dc.identifier http://hdl.handle.net/10803/688212
• dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/10230/56713
• dc.language.iso eng
• dc.publisher Universitat Pompeu Fabra
• dc.rights L'accés als continguts d'aquesta tesi queda condicionat a l'acceptació de les condicions d'ús establertes per la següent llicència Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
• dc.rights http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/
• dc.rights info:eu-repo/semantics/embargoedAccess
• dc.source TDX (Tesis Doctorals en Xarxa)
• dc.subject.keyword Exocytosis
• dc.subject.keyword exocyst
• dc.subject.keyword SMLM
• dc.subject.keyword higher-order structure
• dc.subject.keyword secretory vesicle
• dc.subject.keyword Exocitosi
• dc.subject.keyword exocyst
• dc.subject.keyword super-resolució
• dc.subject.keyword supra-estructura
• dc.subject.keyword vesícules de secreció
• dc.subject.keyword 577
• dc.title Advanced microscopy to resolve the higher-order organization of the exocyst
• dc.type info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
• dc.type info:eu-repo/semantics/publishedVersion