The molecular mechanism of spindle pole focusing: NuMA as a dynein adaptor and microtubule minus end regulator

Abstract

This project investigates the molecular mechanisms underlying chromosome segregation during eukaryotic cell division. Specifically, it explores the role of the motor protein cytoplasmic dynein 1 in maintaining metaphase spindle integrity by clustering microtubule minus ends into focused poles. We conducted in vitro assays using purified proteins and total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy to show that the nuclear mitotic apparatus (NuMA) protein acts as a dynein adaptor. NuMA triggers dynein's processive motility, supported by the cofactors dynactin and lissencephaly 1 (Lis1). In addition, NuMA selectively arrests the growth of microtubule minus ends, binding preferentially to those not capped by the microtubule nucleator γ-tubulin ring complex (γTURC). It can also bind to new minus ends freshly generated by laser ablation. Finally, we showed that the dynein/dynactin/NuMA complex can transport microtubule minus ends. These findings clarify the interplay of dynein, dynactin, NuMA, and Lis1 in organizing spindle poles during cell division.Este proyecto investiga los mecanismos moleculares detrás de la segregación cromosómica en la división celular eucariota, enfocándose en la proteína motora dineína citoplasmática 1 y su rol en mantener la integridad del huso mitótico en metafase. Mediante ensayos in vitro con proteínas purificadas y microscopía de reflexión interna total de fluorescencia (TIRF), demostramos que la proteína del aparato mitótico nuclear (NuMA) actúa como adaptador de la dineína, activando su motilidad procesiva junto a los cofactores dinactina y lissencefalina 1 (Lis1). Además, NuMA detiene selectivamente el crecimiento de los extremos negativos de microtúbulos, prefiriendo aquellos no cubiertos por el nucleador de microtúbulos complejo anular de γ-tubulina (γTURC). También se puede unir a los extremos negativos recién generados por ablación láser. Finalmente, mostramos que el complejo dineína/dinactina/NuMA transporta extremos negativos. Estos hallazgos aclaran la interacción de dineína, dinactina, NuMA y Lis1 en la organización de los polos en la mitosis.Programa de Doctorat en Biomedicina