Such Sanmartin, GerardGutiérrez Gallego, RicardoSegura Noguera, JordiUniversitat Pompeu Fabra. Departament de Ciències Experimentals i de la Salut2024-10-192024-10-192011-04-122010-04-092010-01-282010-04-09http://hdl.handle.net/10230/12210Human growth hormone (GH) participates in human longitudinal growth, lipid and carbohydrate metabolism, and comprises a remarkably number of proteins with similar sequences, generated either genetically or post-translationally, that in some cases show clearly differentiated biological activities. Current methods employed for its quantification are mainly based on a specific immunodetection of the most concentrated GH variants in blood circulation. However, it is not clear neither which variants are recognised in each case, nor which is the real concentration of some of these variants. Probably related, present immunoassays show a disparity of results between them that difficults the comparison of data from different assays, with direct consequences in the clinical field. Within a doping context, the illegal administration of recombinant GH constitutes a complex challenge, given the fact that the pharmaceutical variant and the native 22 kDa GH variant do not show any structural difference that allows a direct detection. However, the administration of the pharmaceutical inhibits the natural production of the hormone, resulting in modifications between the relative concentration of some of these variants. In this case, which variants are detected is of utmost importance, since these constitute the base of this anti-GH doping method. Here, the relevance of some GH variants is addressed, including their generation, characterisation, analysis through specific antibodies and their detection on biological samples.L'hormona de creixement humana (GH) participa en el creixement post-longitudinal i en el metabolisme de lípids i carbohidrats, i comprèn un extraordinari nombre de proteïnes de seqüències similars, generades tant genèticament com posttranslacional, que en alguns casos mostren activitats biològiques clarament diferenciades. Els mètodes actuals emprats per la seva quantificació es basen principalment en una immunodetecció específica de les variants de GH més concentrades en circulació sanguínia. Tanmateix, no resta clar quines variants es reconeixen en cada cas, ni quina és la concentració real d'algunes d'aquestes variants. Possiblement relacionat, els immunoassaigs actualment utilitzats mostren una disparitat de resultats que dificulten la comparació de dades d'assaigs diferents, amb conseqüències directes en el camp clínic. Dins d'un context de dopatge, l'administració il·legal de GH recombinant constitueix un desafiament complex, donat el fet que la variant farmacèutica i la variant de GH nativa de 22 kDa no mostren cap diferència que permeti una detecció directa. No obstant, l'administració del medicament farmacèutic inhibeix la producció natural de la hormona, derivant en canvis entre la concentració relativa d'algunes d'aquestes variants. En aquest cas, és de màxima importància quines variants són detectades, ja que això constitueix la base d'aquest mètode d'antidopatge de GH. Aquí, s'estudia la rellevància d'algunes variants de GH, incloent-hi la seva generació, caracterització, anàlisi via anticossos específics i la seva detecció en mostres biològiques.Programa de doctorat en Biomedicinaapplication/pdfapplication/pdfengADVERTIMENT. L'accés als continguts d'aquesta tesi doctoral i la seva utilització ha de respectar els drets de la persona autora. Pot ser utilitzada per a consulta o estudi personal, així com en activitats o materials d'investigació i docència en els termes establerts a l'art. 32 del Text Refós de la Llei de Propietat Intel·lectual (RDL 1/1996). Per altres utilitzacions es requereix l'autorització prèvia i expressa de la persona autora. En qualsevol cas, en la utilització dels seus continguts caldrà indicar de forma clara el nom i cognoms de la persona autora i el títol de la tesi doctoral. No s'autoritza la seva reproducció o altres formes d'explotació efectuades amb finalitats de lucre ni la seva comunicació pública des d'un lloc aliè al servei TDX. Tampoc s'autoritza la presentació del seu contingut en una finestra o marc aliè a TDX (framing). Aquesta reserva de drets afecta tant als continguts de la tesi com als seus resums i índexs.info:eu-repo/semantics/openAccessinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisamplificació de senyalsuperficialressonància de plasmócaracterització d'anticossosanticossosanticossos anti-GHdicroisme circularsíntesi en fase sòlidathermolisinòlisisthermolisinapurificaciógeneraciófragmentació de pèptidsfragmentació de proteïnesproteòlisis limitadaGH44-191GH1-19122 kDaGH1-4320 kDa17 kDa5 kDahumanafragments de la hormona de creixement humanaisoformes de la hormona de creixementvariants de la hormona de creixement humanaHormona de creixement humanaprotocolC-reactive proteinmannanbinding lectinserum purificationblood purificationMALDImass spectrometrywestern blotimmunoassaySPR-based methodsignal enhancementsurface plasmon resonanceanti-GH antibodiescharacterisation of antibodiesantibodiescircular dichroismsolid phase synthesisthermolysinolysisthermolysingenerationpurificationfragmentationpeptideprotein fragmentationmètode basat en SPRlimited proteolysisGH1-191GH44-191GH1-4322 kDa20 kDa17 kDa5 kDahuman growth hormone fragmentshuman growth hormone isoformshuman growth hormone variantsHuman growth hormoneimmunoassaigwestern blotMALDIespectrometria de massapurificació de sangpurificació de sèrumproteïna C-reactivamannan binding lectinprotocol615