Puig Tintó, MartaGallego, OriolUniversitat Pompeu Fabra. Departament de Medicina i Ciències de la Vida2025-05-052025-05-052023-05-082025-05-022023-05-02http://hdl.handle.net/10230/56713The exocyst is an heterooctameric protein complex that tethers secretory vesicles to the plasma membrane during exocytosis. Each exocytic event is mediated by 10-15 exocysts. However, how multiple exocysts organize in time and space to accomplish their function remains unknown. We resolved the dynamic higher-order structure of the exocyst by correlating live-cell imaging and super-resolution microscopy. Fluorescent temporal markers demonstrated that multiple exocysts follow dynamic higher-order structures that switch from small and compact clusters to wider ring-like organizations with an asymmetric distribution of the exocysts around a central cavity. Conditional mutants linked conformational changes with defined molecular functions and cryo-electron tomography provided accurate descriptors of the vesicle geometry. We propose a model were the multiple exocysts bind the vesicle as compact clusters for four seconds. In a Sec9-dependent process, the exocysts open to form stable arcs and ring-like architectures that are disassembled by Sec18 eight seconds after tethering initiation.L’exocyst és un complex proteic que uneix vesícules de secreció a la membrana plasmàtica durant l’exocitosi. Entre 10 i 15 exocysts participen en cada esdeveniment d’exocitosi, però en desconeixem la seva l’organització espacial i temporal. La combinació de microscòpia en cèl·lules vives i de super-resolució ens ha permès resoldre la supra-estructura de l’exocyst. Mitjançant l’ús de marcadors temporals hem demostrat que aquesta supra-estructura és dinàmica: comença formant clústers compactes que es transformen en estructures anulars al voltant de les quals els exocysts es distribueixen asimètricament. Gràcies als mutants condicionals hem assignat canvis conformacionals a funcions moleculars concretes, i la crio-tomografia electrònica ens ha permès descriure geomètricament les vesícules. Proposem un model on els exocysts s’uneixen a la vesícula formant clústers durant 4 segons. Sec9 indueix l’obertura d’aquests exocysts, que passen a formar arcs i anells estables. 8 segons després de l’inici del procés, l’acció de Sec18 desmunta aquests anells.Programa de doctorat en Biomedicina192 p.application/pdfengL'accés als continguts d'aquesta tesi queda condicionat a l'acceptació de les condicions d'ús establertes per la següent llicència Creative Commons: http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/info:eu-repo/semantics/openAccessinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisExocytosisexocystSMLMhigher-order structuresecretory vesicleExocitosiexocystsuper-resoluciósupra-estructuravesícules de secreció577